蛋白質(zhì)分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共扼雙鍵,使蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)。吸收高峰在280nm處,其吸光度(即光密度值)與蛋白質(zhì)含量成正比。此外,蛋白質(zhì)溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。利用一定波長(zhǎng)下,蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān)系,進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。
方法特點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)便、靈敏、快速,不消耗樣品,測(cè)定后仍能回收使用。
缺點(diǎn):測(cè)定蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確度較差,干擾物質(zhì)多。
干擾物:含有嘌呤、嘧啶、核酸等吸收紫外光的物質(zhì)。
檢出限:50~100ug蛋白含量。
適用范圍:適于用測(cè)定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)
凱氏定氮法被國(guó)內(nèi)外視為蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法,可作為衡量其他蛋白質(zhì)含量檢測(cè)方法準(zhǔn)確性的標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)驗(yàn)原理:
樣品與濃硫酸共熱,含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨(消化),氨又與硫酸作用,變成硫酸氨。經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此酸液被中和的程度可計(jì)算得樣品之氮含量。
方法特點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn):通用性強(qiáng),測(cè)定費(fèi)用低,易實(shí)現(xiàn),儀器簡(jiǎn)單且測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性和重現(xiàn)性好。
缺點(diǎn):實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低。
檢出限:0.2~1mg蛋白含量。
適用范圍:凱氏定氮法測(cè)的是總蛋白的量,一些非蛋白氮無法檢測(cè)出。